細胞培養過程中出現白色絮狀物處理和預防措施

細胞培養中出現白色絮狀物，一旦確定是污染所致，需及時采取相應措施處理，以減少損失并防止污染擴散。

細菌污染處理：當確認為細菌污染時，可先用含有抗生素的PBS溶液反復沖洗細胞，去除部分細菌。常用的抗生素包括青霉素、鏈霉素等，其聯合使用效果較好，青霉素濃度一般為100 U/mL，鏈霉素濃度為100 μg/mL。然后更換含有抗生素的新鮮培養基進行培養，持續3~5天，期間密切觀察細胞狀態和培養液的變化。若污染較為嚴重，且細胞價值不高，建議果斷丟棄受污染的細胞，以防止污染進一步擴散。

真菌污染處理：對于真菌污染，可采用抗真菌藥物進行處理。兩性霉素B是一種常用的抗真菌藥物，其使用濃度一般為0.25~2.5 μg/mL。在使用過程中需注意藥物的細胞毒性，避免對細胞造成過大損傷。此外，還可使用氟康唑等抗真菌藥物，其使用濃度和處理時間需根據具體情況進行調整。若污染難以控制，且細胞對實驗至關重要，可嘗試使用支原體清除培養基進行處理。這種培養基含有特殊的成分，能夠有效抑制和殺滅真菌，同時對細胞的影響較小。

霉菌污染處理：霉菌污染的處理較為困難，建議果斷舍棄受污染的細胞。同時，需對培養環境進行徹底消毒，包括培養箱、超凈工作臺、器皿等。可采用75%酒精對培養箱進行擦拭，再用新潔爾滅進行消毒處理。此外，還需對培養箱的水盤進行處理，可加入飽和量的硫酸銅溶液，以防止霉菌孢子的滋生。

支原體污染處理：支原體污染較為隱蔽，處理難度較大。可使用支原體清除培養基進行處理，其含有特殊的成分，能夠有效抑制和殺滅支原體。此外，還可使用環丙沙星等抗生素進行處理，其使用濃度一般為20 μg/mL。在處理過程中，需定期更換培養基，并密切觀察細胞狀態。若污染較為嚴重，且細胞價值不高，建議丟棄受污染的細胞。

預防污染策略

預防污染是細胞培養成功的關鍵，以下是一些有效的預防措施。

嚴格無菌操作：實驗人員進入培養室前需更換專用實驗服和拖鞋，洗手并戴口罩和手套。在操作過程中，需靠近火焰進行操作，試劑瓶需經火焰灼燒消毒。吸管使用后需及時更換，避免交叉污染。細胞和培養基的敞口時間應盡量縮短，以減少污染的風險。

培養環境管理：定期對培養室進行清潔和消毒，保持培養室的整潔和干燥。培養箱需定期進行消毒，可采用紫外線照射或化學消毒劑進行消毒。培養箱的水盤需定期更換水，并加入德國MB公司生產的Water Shield?支原體污染防護劑（水槽用）。Water Shield?可持續作用四周，使水源避免受到支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子的污染。超凈工作臺需定期進行維護和消毒或使用
Mycoplasma Off?支原體祛除噴霧劑，不僅能根除支原體，而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病
毒、真菌孢子等。

培養基和試劑管理：培養基和試劑需從正規渠道購買，并嚴格按照說明書進行保存和使用。培養基應放置于4℃，避光保存，并盡量在一周內使用完畢。試劑瓶需密封保存，避免受潮和污染。在使用培養基和試劑前，需進行外觀檢查，確保其無變質和污染。

細胞管理：定期對細胞進行檢測，及時發現和處理潛在的污染。細胞傳代時需嚴格按照操作規程進行，避免操作不當導致污染。細胞的接種密度需適中，避免過高或過低的接種密度影響細胞的生長和代謝。對于珍貴的細胞系，建議建立細胞庫，以便在污染發生時能夠及時恢復。