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什么是熒光定量pcr的絕對(duì)定量

2024-05-06 16:02

熒光定量PCR的絕對(duì)定量是一種利用熒光信號(hào)的變化對(duì)PCR過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)初始模板的定量分析的方法。在這個(gè)過(guò)程中，需要使用已知拷貝數(shù)的絕對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品，并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

需要有一個(gè)已知拷貝數(shù)濃度的樣品作為標(biāo)準(zhǔn)品，將其稀釋至少5個(gè)梯度（理論上，每稀釋10倍，Ct值增大3.33）后和待測(cè)樣品同時(shí)上機(jī)進(jìn)行定量檢測(cè)。然后，以標(biāo)準(zhǔn)品拷貝數(shù)的Log值為橫坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品的Ct值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。最后，將檢測(cè)獲得的待測(cè)樣品的Ct值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，就能求得待測(cè)樣品的拷貝數(shù)濃度。

這種方法可以精確地測(cè)量出某個(gè)基因在初始樣品中的具體拷貝數(shù)或濃度，為科學(xué)研究提供了重要的數(shù)據(jù)支持。