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RT-PCR和real-time RT-PCR有何區(qū)別？

2024-01-04 16:29
文章附圖

PCR技術(shù)隨著時間的發(fā)展，分裂變化了很多種，今天分享的就是RT-PCR和real-time RT-PCR兩種的區(qū)別和應(yīng)用。


RT-PCR

RT-PCR被稱為逆轉(zhuǎn)錄 PCR（reverse transcription PCR）或反轉(zhuǎn)錄PCR，結(jié)合了逆轉(zhuǎn)錄和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)兩個步驟，用于在實(shí)驗(yàn)室中復(fù)制和擴(kuò)增特定的RNA序列。


逆轉(zhuǎn)錄

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)


RT-PCR原理：

逆轉(zhuǎn)錄（Reverse Transcription）： RT-PCR的**步是將RNA轉(zhuǎn)錄成相應(yīng)的DNA。這個步驟涉及到逆轉(zhuǎn)錄酶（例如，逆轉(zhuǎn)錄酶或M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶），它能夠?qū)NA模板轉(zhuǎn)錄成相應(yīng)的互補(bǔ)DNA鏈。

PCR（Polymerase Chain Reaction）： 在逆轉(zhuǎn)錄之后，產(chǎn)生的DNA（cDNA）成為PCR的模板。PCR利用DNA聚合酶（例如，Taq聚合酶）將目標(biāo)DNA序列反復(fù)復(fù)制，通過循環(huán)的加熱和降溫過程，每個循環(huán)產(chǎn)生兩倍的DNA。這樣，目標(biāo)序列得以大量擴(kuò)增。

RT-PCR操作步驟

RT-PCR應(yīng)用：

主要用于研究基因表達(dá)、檢測RNA病原體、檢測RNA病毒等。逆轉(zhuǎn)錄的過程將RNA轉(zhuǎn)錄成cDNA，后續(xù)使用PCR進(jìn)行擴(kuò)增。


real-time RT-PCR

real-time RT-PCR的中文名稱是實(shí)時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，是一種結(jié)合了逆轉(zhuǎn)錄（RT）和實(shí)時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）的技術(shù)，用于從RNA樣本中合成相應(yīng)的cDNA，并在逆轉(zhuǎn)錄的同時實(shí)時監(jiān)測和定量擴(kuò)增特定的RNA序列。

圖片


應(yīng)用：

實(shí)時RT-PCR常用于研究基因表達(dá)的定量水平、檢測和定量RNA病毒、評估病原體感染等。它可以提供實(shí)時、定量的結(jié)果，并且能在PCR反應(yīng)過程中動態(tài)監(jiān)測目標(biāo)核酸的變化。