常規(guī)細(xì)胞實驗大匯總（二）

在上期介紹過一些檢測細(xì)胞增殖，細(xì)胞凋亡的常規(guī)方法。

今天來到常規(guī)實驗大匯總的第二期，一起來學(xué)習(xí)細(xì)胞膜片鉗技術(shù)、細(xì)胞遷移和侵襲技術(shù)。

細(xì)胞膜片鉗技術(shù)：

膜片鉗技術(shù)（patch clamp techniques）是采用鉗制電壓或電流的方法對生物膜上離子通道的電活動進(jìn)行記錄的微電極技術(shù)。

檢測原理：

用一個尖端直徑在1.5-3.0um的玻璃微電極接觸細(xì)胞膜表面，通過負(fù)壓吸引使電極尖端與細(xì)胞膜之間形成千兆歐姆以上的阻抗封接，此時電極尖端下的細(xì)胞膜小區(qū)域（膜片, patch）與其周圍在電學(xué)上分隔，在此基礎(chǔ)上固定（鉗制, Clamp）電位，對此膜片上的離子通道的離子電流進(jìn)行監(jiān)測及記錄。

用途：

細(xì)胞膜片鉗技術(shù)是當(dāng)前研究細(xì)胞膜電流及離子通道的最重要的技術(shù)?？捎糜谘芯颗c藥物作用有關(guān)的心肌離子通道、離子通道生理與病理作用機(jī)制。另外，還利用膜片鉗對單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究、對藥物作用機(jī)制的研究、創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選研究、甚至是能用在神經(jīng)科學(xué)的相關(guān)研究中。

由于其應(yīng)用廣泛，因此被稱為研究離子通道的“金標(biāo)準(zhǔn)”。

特點：

實用、快速、靈敏、準(zhǔn)確及重復(fù)性好，并且還在不斷地改良、優(yōu)化。

細(xì)胞遷移和侵襲 Transwell：

是一種用來研究細(xì)胞侵襲的實驗技術(shù)。

檢測原理：

簡單來說，就是用一層膜將高營養(yǎng)的培養(yǎng)基與低營養(yǎng)的培養(yǎng)基分隔開。然后將細(xì)胞放在低營養(yǎng)的培養(yǎng)基中，細(xì)胞為了生存，為了獲取更多的營養(yǎng)，會向高營養(yǎng)的培養(yǎng)基里面移動。但是由于膜的存在，因此必須要進(jìn)行穿膜。

在膜上涂上一層基質(zhì)膠，用來模仿細(xì)胞外基質(zhì)。細(xì)胞想要通過膜，就需要先把基質(zhì)消化了才能進(jìn)入高營養(yǎng)培養(yǎng)基中。最終只需要檢測高營養(yǎng)的培養(yǎng)基中的細(xì)胞量就推算出細(xì)胞的侵襲能力。

用途：

由于商品化Transwell試劑盒的出現(xiàn)，使得濾膜多樣化，應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜，就可以進(jìn)行共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲等多種方面的研究。

特點：

高效、迅速，普適度高，可應(yīng)用于多種實驗。

劃痕實驗：

也叫創(chuàng)傷愈合實驗，是一種簡單快捷的測定細(xì)胞遷移運動與修復(fù)能力的方法。

檢測原理：

在體外培養(yǎng)條件下，在培養(yǎng)皿中的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其它無菌的硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，用以去除中央部分的細(xì)胞，然后按照實驗設(shè)定的時間（36h、72h等），繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞是否生長至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞是否生長至中央劃痕區(qū)，進(jìn)而判斷細(xì)胞的生長遷移能力。

實驗通常還需設(shè)定正常對照組和實驗組,實驗組往往是加了某種處理因素、藥物或外源性基因等，通過不同分組之間的細(xì)胞對于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，來判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。

用途：

可以用來確定貼壁細(xì)胞的遷移速率。

特點：

簡捷、成本低、實驗結(jié)果直觀。但測量適用的細(xì)胞范圍較小，一般只適用于上皮細(xì)胞，纖維樣細(xì)胞。

Ausbian血清在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻：