|
支原體常規(guī)檢測方法匯總(二)2021-11-23 16:15來源:威正翔禹|締一生物
大家晚上好!
上周我們一起討論了基于Venor?Gem qEP試劑盒的支原體qPCR經(jīng)典檢測法,也是目前使用比較廣泛的方法之一。
當(dāng)然啦,關(guān)于支原體的檢測,方法眾多。今天我們就來了解一下,操作相對更簡單的“一步法”。該方法會用到Minerva Biolabs公司的另一種試劑盒——VenorGeM? OneStep,它與上周介紹的經(jīng)典法試劑盒類似,都是利用了熒光定量PCR的基本原理。 (前情提要在這里,戳戳下方圖片傳送到經(jīng)典法支原體檢測試劑盒詳解)
不同的是,“一步法”試劑盒中,直接將內(nèi)控添加到預(yù)混液中,使用起來更加方便、節(jié)省時間。
下面我們就來詳細(xì)介紹一下VenorGeM? OneStep支原體檢測試劑盒。 使用方法 ![]() // 步驟 與經(jīng)典法大致相同: 樣品處理?試劑制備?體系建立?啟動PCR反應(yīng)?結(jié)果判定 樣品處理: 取100μl左右的細(xì)胞上清液 95℃孵育后離心,取適量用于后續(xù)qPCR。 ![]() 細(xì)胞培養(yǎng)樣品易含豐富的DNA酶,在低溫下也能降解支原體DNA。因而推薦進(jìn)行樣品穩(wěn)定化處理。 試劑制備: 將緩沖液、預(yù)混液、陽性對照等試劑按照說明書要求,該離心的離心、該混合的混合,處理好后扣緊蓋子備用。 ![]() PCR體系建立: 在PCR管中,根據(jù)需要,加入樣品、陽性對照、新鮮培養(yǎng)基(陰性對照),并且設(shè)置好重復(fù)孔,蓋好蓋子,震蕩混勻。 ![]() 啟動PCR反應(yīng): 按照所需參數(shù),設(shè)置好PCR儀,啟動程序(具體參數(shù)詳見產(chǎn)品使用說明或是締一生物官方網(wǎng)站,點擊下方閱讀原文即可)。 ![]() FAM通道:檢測支原體熒光信號。 HEX通道:檢測內(nèi)控對照熒光信號 支原體DNA和內(nèi)控DNA,存在信號之間的競爭性抑制 支原體DNA越多,F(xiàn)AM通道信號越高 檢測內(nèi)控對照的HEX信號通道信號越低。 定量需要基于Ct值和DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線 Ct<40為陽性結(jié)果。Ct≥40為陰性結(jié)果。 ![]() 小結(jié): 總的來說,一步法試劑盒是經(jīng)典版試劑盒的升級版。 在以下幾個方面都是相同的: ①都具有高特異性:一次即可涵蓋所有常見易感染細(xì)胞的支原體物種(包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體)。與細(xì)菌和真核DNA無交叉反應(yīng)。 ②都具有高靈敏度:最高檢測限可達(dá)到10CFU/ml。 ③都具有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA,便于特異性驗證。 ④都有相應(yīng)配套的支原體絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品,便于最后定量檢測。 不同之處在于,一步法試劑盒省去了配置內(nèi)控對照的環(huán)節(jié),為實驗人員節(jié)省了寶貴時間,但相應(yīng)的,價格也會比經(jīng)典法試劑盒高出一部分。 如果你對本公司產(chǎn)品感興趣,想要了解更多,歡迎訪問 北京締一生物官網(wǎng):www.dyshengwu.com 或聯(lián)系北京締一生物公司 咨詢熱線: 400-166-8600 010-84118494 021-64186645 13811167915 咨詢QQ: 1580434811 咨詢QQ: 1258888686 客服郵箱:servicebj@viansaga.com 客服郵箱:servicesh@viansaga.com 聲明:本網(wǎng)站所有注明“來源:締一生物”的內(nèi)容,版權(quán)均屬于北京締一生物網(wǎng)站所有,受到知識產(chǎn)權(quán)的法律保護(hù)。如需引用、轉(zhuǎn)載,須注明來源及原文鏈接。如內(nèi)容涉及實質(zhì)性修改,須來電獲取書面授權(quán),且轉(zhuǎn)載時,須注明“來源:締一生物”。 最終解釋權(quán)歸締一生物所有。 上一篇: 支原體常規(guī)檢測方法匯總(三)
下一篇: 支原體常規(guī)檢測方法匯總(一)
|