Vero細(xì)胞的培養(yǎng)方式

Vero細(xì)胞是世界衛(wèi)生組織和中國(guó)生物制品規(guī)程認(rèn)可的病毒疫苗生產(chǎn)細(xì)胞系 。采用 V ero 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的病毒疫苗主要包括狂犬病疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、流感疫苗、乙型腦炎疫苗、出血熱疫苗和手足口病疫苗等。Vero細(xì)胞有貼壁特性，很大程度上決定了病毒疫苗的生產(chǎn)是通過(guò)Vero細(xì)胞的微載體固定化培養(yǎng)而得以實(shí)現(xiàn)。

軍科院生物工程所曾比較了四種商品化微載體對(duì)Vero細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。他們先取適量的微載體，然后用PBS浸泡過(guò)夜，再吸出PBS，用PBS清洗3次，再高壓消毒后，加入含1%新生牛血清的DMEM/F12，放置在37℃培養(yǎng)箱備用。

Vero細(xì)胞則按2X105細(xì)胞/ml接種培養(yǎng)瓶和轉(zhuǎn)瓶，再加入含1%新生牛血清的DMEM/F12，置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。需要時(shí)進(jìn)行傳代。之后將該細(xì)胞作為種子細(xì)胞。

然后將固定質(zhì)量的4種微載體分別移入250mlBellco攪拌式細(xì)胞培養(yǎng)瓶。Vero細(xì)胞接種后，補(bǔ)足培養(yǎng)基至100ml，設(shè)置攪拌速度為30r/min懸浮培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)基顏色在必要時(shí)更換新鮮培養(yǎng)基。

研究人員用顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，并取1ml細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)以測(cè)定Vero細(xì)胞密度和活力（儀器采用細(xì)胞密度和活力自動(dòng)分析儀），采用多參數(shù)生物分析系統(tǒng)定量檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中的葡萄糖、乳酸和谷氨酰胺濃度，因而可測(cè)算葡萄糖比消耗速率，乳酸比生產(chǎn)速率等。

微載體固定化培養(yǎng)被廣泛應(yīng)用于病毒疫苗和重組蛋白藥物生產(chǎn)。結(jié)果顯示，在四種商品化微載體中，Cytodex 1微載體（固體實(shí)心微球）效果較好，細(xì)胞密度高。同時(shí)細(xì)胞代謝速率在四種微載體中都很接近。研究者還指出，Vero細(xì)胞在接種后24h才基本完成貼壁階段。

在該次培養(yǎng)中，新生牛血清用量為1%，雖然用量較少，但仍不可缺少。上海威正翔禹生物公司進(jìn)口的澳洲產(chǎn)Ausbian精制新生牛血清(γ照射)系新西蘭血源（來(lái)自新西蘭政府獸醫(yī)管理局監(jiān)管下的具有出口注冊(cè)證的正規(guī)屠宰場(chǎng)），GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)。

品名：Ausbian精制新生牛血清

貨號(hào)：WS500N

規(guī)格：500ml/瓶

血清經(jīng)過(guò)0.22微米過(guò)濾和15kGy的gamma射線照射，降低微生物風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)檢測(cè)無(wú)BVD（牛病毒性腹瀉病毒）、PI-3（牛副流感病毒3型）和IBR（牛傳染性鼻氣管炎）。歡迎廣大新生牛血清用戶前來(lái)咨詢購(gòu)買(mǎi)。客服電話：400-166-8600，客服QQ：1580434811，客服郵箱：servicebj@viansaga.com。

參考文獻(xiàn)

劉紅，等.   Vero細(xì)胞在不同微載體固定化培養(yǎng)中的生長(zhǎng)和代謝. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2012, 12 (36): 7001-7006