海產(chǎn)品中副溶血性弧菌檢測方法

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus，V.p)是一種革蘭氏陰性嗜鹽菌，是海水和江河口環(huán)境中的固有微生物。它能通過食物和水引起人類的疾病，同時(shí)也對(duì)生長在海水和江河口環(huán)境中的動(dòng)物有致病性，包括養(yǎng)殖的動(dòng)物。

V.p廣泛存在于各種海產(chǎn)品中，魚體帶菌率約為20％～90％。一般情況下，海產(chǎn)品體內(nèi)外均帶菌，但當(dāng)海產(chǎn)品作為食品被捕撈后，體外菌體迅速死亡，體內(nèi)的副溶血性弧菌會(huì)很快感染整個(gè)海產(chǎn)品。

中國水產(chǎn)品出口國主要集中在日本、美國、歐盟和韓國，僅這四大市場就占到了總出口量的85％左右。而這四個(gè)國家對(duì)進(jìn)口水產(chǎn)品的安全要求中都明確規(guī)定副溶血性弧菌等致病菌一律不得檢出。對(duì)原產(chǎn)自中國的進(jìn)口水產(chǎn)品強(qiáng)制性要求進(jìn)行V.p檢測，檢測結(jié)果為陽性時(shí)產(chǎn)品將被就地銷毀，這給我國水產(chǎn)品的出口設(shè)置了貿(mào)易壁壘。

為了減少我國食品在進(jìn)出口貿(mào)易中的經(jīng)濟(jì)損失，消除消費(fèi)者的食品安全隱患，締一生物為您流行的檢測方法進(jìn)行總結(jié)歸納，以便為檢測方法的應(yīng)用和發(fā)展提供參考。

傳統(tǒng)培養(yǎng)法

副溶血性弧菌的傳統(tǒng)培養(yǎng)法是指國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等，通常認(rèn)為是食品檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”，目前副溶血性弧菌的主要依據(jù)GB 4789.7—2013《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 副溶血性弧菌檢驗(yàn)》的方法，從樣品中分離出副溶血性弧菌，經(jīng)過樣本制備、增菌、分離、純培養(yǎng)、初步鑒定、確定鑒定幾個(gè)步驟，分離副溶血性弧菌一般用TCBS平板。

近年來，國標(biāo)中規(guī)定，可用顯色培養(yǎng)基分離。顯色培養(yǎng)基是在生化反應(yīng)的基礎(chǔ)上開發(fā)的技術(shù)，利用鑒別性培養(yǎng)基的原理，向分離培養(yǎng)基中加入細(xì)菌特異性酶的顯色底物，以達(dá)到只須用肉眼辨別顏色就能方便地從近似的菌落中找出目的菌落的目的。檢測結(jié)果直觀，易于觀察，減少了進(jìn)行純培養(yǎng)和生化鑒定的步驟，大大提高了檢測效率。且具有成本低、特異性強(qiáng)、靈敏度高和檢測快速、操作方便等優(yōu)點(diǎn)，是國內(nèi)外微生物檢測的一個(gè)主要發(fā)展方向。

締一生物推薦您使用在HiMedia公司（國際知名微生物公司）的HiCrome弧菌顯色培養(yǎng)基（貨號(hào)：MV1682），在顯色培養(yǎng)基上，細(xì)菌β-半乳糖苷酶和培養(yǎng)基中所包含底物的反應(yīng)發(fā)生顯色反應(yīng)，副溶血性弧菌呈藍(lán)綠色。與此同時(shí)，還可以分離出霍亂弧菌，霍亂弧菌在該培養(yǎng)基上呈紫色，易于分離。

免疫學(xué)法

主要包括酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和免疫層析試紙條技術(shù)。ELISA是常見的免疫學(xué)檢測方法，該方法實(shí)現(xiàn)了在細(xì)胞水平上對(duì)抗原或抗體的示蹤，或在微克、甚至納克水平上對(duì)抗原(致病菌)或抗體的定量。

免疫層析試紙條技術(shù)，該技術(shù)是20世紀(jì)80年代初發(fā)展起來的，因其具有簡便、快速、廉價(jià)、適應(yīng)性廣等優(yōu)點(diǎn)，可用于基層單位對(duì)各種食源致病菌的快速篩查檢測。依據(jù)反應(yīng)時(shí)

抗原與抗體結(jié)合方式的不同，主要可將其分為雙抗夾心免疫層析法和競爭免疫層析法兩類。

分子生物學(xué)法

主要有PCR技術(shù)，包括常規(guī)PCR、多重PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等，該方法特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、省時(shí)、對(duì)標(biāo)本的純度要求低、不需要分離細(xì)菌等特點(diǎn)，因此在國內(nèi)外被研究人員廣泛應(yīng)用于V.p的檢測。

PCR檢測方法本身存在一定的缺陷：一是細(xì)胞死后其DNA不能快速降解，導(dǎo)致環(huán)境DNA污染而出現(xiàn)假陽性結(jié)果；二是食品中很可能存在對(duì)PCR反應(yīng)起抑制作用的物質(zhì)而出現(xiàn)假陰性結(jié)果；三是這種分子檢測方法需要價(jià)格昂貴的PCR儀，不適于基層推廣應(yīng)用。在運(yùn)用PCR方法進(jìn)行實(shí)物檢測過程中，要注意避免樣品中的外源DNA污染和雜質(zhì)對(duì)PCR反應(yīng)的干擾作用。”

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商，在微生物培養(yǎng)和檢測領(lǐng)域，一如既往地為您帶來優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。

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