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霍亂弧菌的分離與鑒定

2018-11-13 11:03來(lái)源:締一生物

霍亂是一種古老且流行廣泛的烈性傳染病之一,屬于國(guó)際檢疫傳染病,曾在世界上引起多次大流行。霍亂弧菌是該病的病原體,學(xué)名V.cholera,屬弧菌科,是一種革蘭氏陰性菌。



人類(lèi)在自然情況下是霍亂弧菌的主要易感者,通過(guò)污染的水源或飲食物經(jīng)口傳染。在一定條件下,霍亂弧菌進(jìn)入小腸后,依靠鞭毛的運(yùn)動(dòng),穿過(guò)粘膜表面的粘液層,可能藉菌毛作用粘附于腸壁上皮細(xì)胞上,在腸粘膜表面迅速繁殖,經(jīng)過(guò)短暫的潛伏期后便急驟發(fā)病。該菌不侵入腸上皮細(xì)胞和腸腺,也不侵入血流,僅在局部繁殖和產(chǎn)生霍亂腸毒素,此毒素作用于不粘膜上皮細(xì)胞與腸腺使腸液過(guò)度分泌,從而患者出現(xiàn)上吐下瀉,瀉出物呈“米泔水樣”并含大量弧菌,此為本病典型的特征。


霍亂弧菌分離與鑒定方法


生化鑒定


生化鑒定前,先分離霍亂弧菌,通常情況下,霍亂弧菌在TCBS培養(yǎng)基上典型霍亂弧菌菌落為黃色,扁平,真徑 2-3 mm;副溶血弧菌菌落呈圓形,邊緣整齊、濕潤(rùn)、稍混濁、半透明,多數(shù)具尖心、斗笠狀,藍(lán)綠色菌落,直徑2-4 mm。


但傳統(tǒng)TCBS培養(yǎng)基上的其他的蔗糖發(fā)酵菌會(huì)影響TCBS瓊脂上弧菌的鑒定,影響檢測(cè)結(jié)果。或選用顯色培養(yǎng)基分離,締一生物為您推薦HiMedia公司(國(guó)際知名微生物公司)的HiCrome弧菌顯色培養(yǎng)基(貨號(hào):MV1682),在該培養(yǎng)基上細(xì)菌β-半乳糖苷酶和培養(yǎng)基中所包含底物發(fā)生反應(yīng),使霍亂弧菌呈現(xiàn)紫色菌落;同時(shí)可以分離出副溶血性弧菌,呈現(xiàn)藍(lán)綠色菌落,可初步確認(rèn)副溶血性弧菌和霍亂弧菌的存在。


可選用HiMedia公司HiBio-IDTM弧菌生化鑒定卡(貨號(hào):KB007), 12種生化反應(yīng):

1

伏普試驗(yàn)

2

精氨酸脫羧試驗(yàn)

3

鹽耐量試驗(yàn)(1%)

4

ONPG試驗(yàn)

5

檸檬酸鹽利用試驗(yàn)

6

鳥(niǎo)氨酸脫羧試驗(yàn)

7

甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)

8

阿拉伯糖發(fā)酵試驗(yàn)

9

蔗糖發(fā)酵試驗(yàn)

10

葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)

11

水楊苷發(fā)酵試驗(yàn)

12

纖維二糖發(fā)酵試驗(yàn)


特點(diǎn):

△操作簡(jiǎn)單,省時(shí)省力

△省心,所需試劑都包含在試劑盒中

△高效率,一次孵育即出結(jié)果

△實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠


2.血清凝集法


   根據(jù)弧菌O抗原不同,分成Ⅵ個(gè)血清群,第Ⅰ群包括霍亂弧菌的兩個(gè)生物型。第Ⅰ群A、B、C三種抗原成份可將霍亂弧菌分為三個(gè)血清型:含AC者為原型(又稱(chēng)稻葉型),含AB者為異型(又稱(chēng)小川型),A、B、C均有者稱(chēng)中間型(彥島型)。


  1992年10月在印度東南部又發(fā)現(xiàn)了一個(gè)引起霍亂流行的新血清型菌株(0139),它引起的霍亂在臨床表現(xiàn)及傳播方式上與古典型霍亂完全相同,但不能被01群霍亂弧菌診斷血清所凝集,抗01群的抗血清對(duì)0139菌株無(wú)保護(hù)性免疫。在水中的存活時(shí)間較01群霍亂弧菌長(zhǎng),因而有可能成為引起世界性霍亂流行的新菌株。


3.核酸擴(kuò)增法


  核酸擴(kuò)增兩端,然后在體外模擬DNA體內(nèi)復(fù)制的過(guò)程反復(fù)擴(kuò)增,使靶序列放大上萬(wàn)倍甚至上百萬(wàn)倍而被檢測(cè)出來(lái)。技術(shù),即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chainreaction,PCR),其基本原理是設(shè)計(jì)、合成兩條寡核苷酸,作為引物,對(duì)應(yīng)于待測(cè)病原微生物某一段特異性序列。


由霍亂弧菌引起的霍亂疾病,對(duì)人類(lèi)健康危害很大,有效的檢測(cè)鑒定出霍亂弧菌對(duì)人類(lèi)健康有著重要意義。


締一生物作為HiMedia公司在中國(guó)的代理商,在微生物培養(yǎng)和檢測(cè)領(lǐng)域,一如既往地為您帶來(lái)優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。

如需詳細(xì)了解,可訪問(wèn)公司官網(wǎng):

http://m.dundai002.com/ ;咨詢(xún)電話:400-166-8600。