霍亂弧菌的分離與鑒定

霍亂是一種古老且流行廣泛的烈性傳染病之一，屬于國(guó)際檢疫傳染病，曾在世界上引起多次大流行。霍亂弧菌是該病的病原體，學(xué)名V.cholera，屬弧菌科，是一種革蘭氏陰性菌。

人類(lèi)在自然情況下是霍亂弧菌的主要易感者，通過(guò)污染的水源或飲食物經(jīng)口傳染。在一定條件下，霍亂弧菌進(jìn)入小腸后，依靠鞭毛的運(yùn)動(dòng)，穿過(guò)粘膜表面的粘液層，可能藉菌毛作用粘附于腸壁上皮細(xì)胞上，在腸粘膜表面迅速繁殖，經(jīng)過(guò)短暫的潛伏期后便急驟發(fā)病。該菌不侵入腸上皮細(xì)胞和腸腺，也不侵入血流，僅在局部繁殖和產(chǎn)生霍亂腸毒素，此毒素作用于不粘膜上皮細(xì)胞與腸腺使腸液過(guò)度分泌，從而患者出現(xiàn)上吐下瀉，瀉出物呈“米泔水樣”并含大量弧菌，此為本病典型的特征。

霍亂弧菌分離與鑒定方法

生化鑒定

生化鑒定前，先分離霍亂弧菌，通常情況下，霍亂弧菌在TCBS培養(yǎng)基上典型霍亂弧菌菌落為黃色，扁平，真徑 2-3 mm；副溶血弧菌菌落呈圓形，邊緣整齊、濕潤(rùn)、稍混濁、半透明，多數(shù)具尖心、斗笠狀，藍(lán)綠色菌落，直徑2-4 mm。

但傳統(tǒng)TCBS培養(yǎng)基上的其他的蔗糖發(fā)酵菌會(huì)影響TCBS瓊脂上弧菌的鑒定，影響檢測(cè)結(jié)果。或選用顯色培養(yǎng)基分離，締一生物為您推薦HiMedia公司（國(guó)際知名微生物公司）的HiCrome弧菌顯色培養(yǎng)基（貨號(hào)：MV1682），在該培養(yǎng)基上細(xì)菌β-半乳糖苷酶和培養(yǎng)基中所包含底物發(fā)生反應(yīng)，使霍亂弧菌呈現(xiàn)紫色菌落；同時(shí)可以分離出副溶血性弧菌，呈現(xiàn)藍(lán)綠色菌落，可初步確認(rèn)副溶血性弧菌和霍亂弧菌的存在。

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2.血清凝集法

   根據(jù)弧菌O抗原不同，分成Ⅵ個(gè)血清群，第Ⅰ群包括霍亂弧菌的兩個(gè)生物型。第Ⅰ群A、B、C三種抗原成份可將霍亂弧菌分為三個(gè)血清型：含AC者為原型（又稱(chēng)稻葉型），含AB者為異型（又稱(chēng)小川型），A、B、C均有者稱(chēng)中間型（彥島型）。

  1992年10月在印度東南部又發(fā)現(xiàn)了一個(gè)引起霍亂流行的新血清型菌株（0139），它引起的霍亂在臨床表現(xiàn)及傳播方式上與古典型霍亂完全相同，但不能被01群霍亂弧菌診斷血清所凝集，抗01群的抗血清對(duì)0139菌株無(wú)保護(hù)性免疫。在水中的存活時(shí)間較01群霍亂弧菌長(zhǎng)，因而有可能成為引起世界性霍亂流行的新菌株。

3.核酸擴(kuò)增法

  核酸擴(kuò)增兩端，然后在體外模擬DNA體內(nèi)復(fù)制的過(guò)程反復(fù)擴(kuò)增，使靶序列放大上萬(wàn)倍甚至上百萬(wàn)倍而被檢測(cè)出來(lái)。技術(shù)，即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chainreaction，PCR），其基本原理是設(shè)計(jì)、合成兩條寡核苷酸，作為引物，對(duì)應(yīng)于待測(cè)病原微生物某一段特異性序列。

由霍亂弧菌引起的霍亂疾病，對(duì)人類(lèi)健康危害很大，有效的檢測(cè)鑒定出霍亂弧菌對(duì)人類(lèi)健康有著重要意義。

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