微生物法與HPLC法測定葉酸含量方法比較

GB 10765-2010《嬰幼兒配方食品》中規(guī)定了葉酸可以作為嬰兒配方食品添加物。因此準(zhǔn)確地測定葉酸的含量對(duì)嬰幼兒配方產(chǎn)品的生產(chǎn)加工、功效評(píng)價(jià)等有重要意義。維生素的檢測方法有儀器法、微生物法和基于微生物法原理的試劑盒法。微生物法是目前應(yīng)用最為廣泛的，也是美國官方分析化學(xué)家協(xié)會(huì)的推薦方法。目前，國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.211-2014《食品中葉酸的測定》和GB 5413.16-2010《嬰幼兒配方食品和乳品中葉酸(葉酸鹽活性)測定》中對(duì)食品和嬰兒食品和乳制品中葉酸的測定均采用微生物法。

除微生物法以外，還可以選用高效液相法測定葉酸的含量。高效液相色譜法是利用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵人裝有填充劑的色譜柱，對(duì)供試品進(jìn)行分離側(cè)定的色譜方法。注人的供試品，由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并依次進(jìn)人檢測器，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理色譜信號(hào)。

高效液相法測定食品中葉酸含量操作方法和所用藥品分析相似：稱取磨細(xì)的樣品置于離心管中，加入流動(dòng)相液體，超聲波提取15 min－30 min。取出后加入流動(dòng)相定容，搖勻后過濾，濾液用 HPLC 法分析。

在有限的空間與營養(yǎng)成分條件下，微生物的生長過程會(huì)受到競爭與抑制的作用。選用微生物法測定葉酸含量時(shí)，自配的基礎(chǔ)培養(yǎng)基雜質(zhì)含量高，建議使用HiMedia公司生產(chǎn)的葉酸測定用培養(yǎng)基（貨號(hào)：M543）。培養(yǎng)基的pH值對(duì)L.C生長很重要，一般保持在pH6.8~7.2,過高過低均不利于細(xì)菌生長。測定葉酸常用的菌種酪乳酸桿菌（ATCC 7469）。為保證測定管中滴加等量的接種液,接種液可用10mL滅菌針筒吸取，水平固定于鐵架臺(tái)上輕輕旋轉(zhuǎn)推桿，滴加菌液。測定管比色前，應(yīng)用混勻器將菌液搖勻后進(jìn)行比色。

微生物法與高效液相色譜法相比較，其優(yōu)點(diǎn)是可以測定成分復(fù)雜樣品中的化合物形式葉酸，結(jié)果更準(zhǔn)確；對(duì)于添加劑形式的葉酸則與HPLC法具有同樣的準(zhǔn)確度，同時(shí)微生物法具有靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，檢測限可達(dá)到0.01ng·mL-1，而高效液相色譜法檢出限為10μg·mL-1，且價(jià)格便宜。但微生物法實(shí)驗(yàn)周期長，每周一次的菌種傳代保藏比較繁瑣；高效液相色譜法的特點(diǎn)是測定結(jié)果準(zhǔn)確、操作簡便、省時(shí)省力、分析速度快、分離效果好，是近年來發(fā)展速度較快的測定葉酸的方法，分析操作方法和所用藥品分析相似，適合檢測純品，但分析成本高，液相色譜儀價(jià)格及日常維護(hù)費(fèi)用貴。