活性因子的生物測定法

在分析化學中，常常采用色譜、質(zhì)譜、磁共振和一般生化以及免疫學方法對樣本成分進行測定。但還存在一類特殊的測定方法，即生物測定法。生物測定法的產(chǎn)生由來已久，常常用于有生物活性和生理功能的因子的測定。它常常采用一種哺乳動物細胞或者一種細菌，作為可用于觀察或測量的響應(yīng)器或效應(yīng)器(effector)，來對活性因子進行檢測，這也有些近似藥效學實驗。例如白細胞介素2，它是一種T細胞生長因子，它是用小鼠的T淋巴細胞系CTLL-2細胞的增殖來檢測，ED50等于0.1ng/ml，可見該法的靈敏度相當高。

因此，生物測定在方法學上是一種很有特點、很有用的方法。它也不限于測定某個因子，而也可以測定生物制品，如用二倍體細胞的促生長狀況來質(zhì)控胎牛血清。在食品領(lǐng)域中，也有生物測定法，只不過是其中的一個分支，是微生物培養(yǎng)法，或微生物法，來檢測維生素，如微生物B12、葉酸、泛酸、煙酸、生物素等。

維生素也是一類活性因子，具有重要的生理作用。例如，缺少葉酸會導致胎兒神經(jīng)管發(fā)育障礙。而我國的嬰幼兒配方乳品中，存在有的品牌葉酸等維生素不足的情況，因而達不到補充營養(yǎng)的效果。因此，測定食品中的維生素含量十分重要，尤其是奶制品。

微生物法測定維生素，原理和上面所說差不多。通過添加維生素標準品或樣品中的維生素，使原先不含有這種維生素的培養(yǎng)基具有了這種營養(yǎng)，從而使鼠李糖乳桿菌、萊士曼乳桿菌、植物乳桿菌等測定菌能夠不斷增殖，直到這種維生素營養(yǎng)耗盡。而檢測OD值可以確定試管中的菌量。需要注意的是，為了保證線性增長，需要在適當?shù)姆秶鷥?nèi)進行標曲和測定，必要的話對樣本進行稀釋。又葉酸測定菌鼠李糖乳桿菌據(jù)報道，在增殖過程中容易產(chǎn)生大量絮狀沉淀，尤其在高濃度標準管中更為明顯。因此建議將絮狀物質(zhì)進行充分震蕩，并快速進行光密度的測定。同時注意所用初始培養(yǎng)基應(yīng)盡量不含痕量待測的維生素，否則會造成標曲偏移和本底過高。目前該產(chǎn)品只有進口的質(zhì)量較為可靠，如微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)商HiMedia公司生產(chǎn)的葉酸干酪培養(yǎng)基和維生素B12測定用培養(yǎng)基。

總之，微生物法在生物測定法中靈敏度極高，而且操作步驟簡單，不需要特別的技巧和設(shè)備，也不需要一系列的提純步驟。即使有些類別樣品需要提取，但步驟仍然簡單，因此微生物法在生物測定法中仍然占有重要的一席之地。