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活性因子的生物測定法

2018-05-16 10:24來源:威正翔禹|締一生物

在分析化學中,常常采用色譜、質(zhì)譜、磁共振和一般生化以及免疫學方法對樣本成分進行測定。但還存在一類特殊的測定方法,即生物測定法。生物測定法的產(chǎn)生由來已久,常常用于有生物活性和生理功能的因子的測定。它常常采用一種哺乳動物細胞或者一種細菌,作為可用于觀察或測量的響應(yīng)器或效應(yīng)器(effector),來對活性因子進行檢測,這也有些近似藥效學實驗。例如白細胞介素2,它是一種T細胞生長因子,它是用小鼠的T淋巴細胞系CTLL-2細胞的增殖來檢測,ED50等于0.1ng/ml,可見該法的靈敏度相當高。


因此,生物測定在方法學上是一種很有特點、很有用的方法。它也不限于測定某個因子,而也可以測定生物制品,如用二倍體細胞的促生長狀況來質(zhì)控胎牛血清。在食品領(lǐng)域中,也有生物測定法,只不過是其中的一個分支,是微生物培養(yǎng)法,或微生物法,來檢測維生素,如微生物B12、葉酸、泛酸、煙酸、生物素等。


維生素也是一類活性因子,具有重要的生理作用。例如,缺少葉酸會導致胎兒神經(jīng)管發(fā)育障礙。而我國的嬰幼兒配方乳品中,存在有的品牌葉酸等維生素不足的情況,因而達不到補充營養(yǎng)的效果。因此,測定食品中的維生素含量十分重要,尤其是奶制品。


微生物法測定維生素,原理和上面所說差不多。通過添加維生素標準品或樣品中的維生素,使原先不含有這種維生素的培養(yǎng)基具有了這種營養(yǎng),從而使鼠李糖乳桿菌、萊士曼乳桿菌、植物乳桿菌等測定菌能夠不斷增殖,直到這種維生素營養(yǎng)耗盡。而檢測OD值可以確定試管中的菌量。需要注意的是,為了保證線性增長,需要在適當?shù)姆秶鷥?nèi)進行標曲和測定,必要的話對樣本進行稀釋。又葉酸測定菌鼠李糖乳桿菌據(jù)報道,在增殖過程中容易產(chǎn)生大量絮狀沉淀,尤其在高濃度標準管中更為明顯。因此建議將絮狀物質(zhì)進行充分震蕩,并快速進行光密度的測定。同時注意所用初始培養(yǎng)基應(yīng)盡量不含痕量待測的維生素,否則會造成標曲偏移和本底過高。目前該產(chǎn)品只有進口的質(zhì)量較為可靠,如微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)商HiMedia公司生產(chǎn)的葉酸干酪培養(yǎng)基和維生素B12測定用培養(yǎng)基。


總之,微生物法在生物測定法中靈敏度極高,而且操作步驟簡單,不需要特別的技巧和設(shè)備,也不需要一系列的提純步驟。即使有些類別樣品需要提取,但步驟仍然簡單,因此微生物法在生物測定法中仍然占有重要的一席之地。